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【正海新知】PCR實驗室建設要求及防控建議

發布日期:2020-11-12 發布人: 原創 瀏覽次數:720



聚合酶鏈鎖反應,Polymerase chain reaction,簡稱PCR,是一種分子生物學技術,用于擴增特定的DNA片段,這種方法可在生物體外進行,不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。PCR這項技術,被廣泛地運用在醫學和生物學的實驗室,例如用于判斷檢體中是否會表現 某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復制,以及親子鑒定。

Part 01

PCR實驗室平面布局

PCR實驗室原則上分為4個單獨的工作區域,由擴增前區到擴增后區,且要嚴格分開。實驗材料、試劑、記錄筆、紙、清潔材料等,只能從擴增前區流向擴增后區,即從試劑制備區--樣品制備區---擴增區---擴增產物分析區,不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區流動到擴增后區,不得逆向流動。各工作區域應設置緩沖間,工作間與緩沖間之間宜安裝聯鎖裝置。不同功能的核酸檢驗工作區應是分隔獨立的工作室,并有明顯的標志,各區間不能直通。各區之間如果是緊密相連,需安裝物品 傳遞窗。每個工作區域的頂部應安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm。


實驗室較為理想的布局模式為有一個專用走廊,試劑制備區,樣品制備區,擴增區和產物分析區很規范的排列在一起。內實驗室區域設為正壓或常壓狀態,緩沖間內設為負壓狀態,使這三個區的空氣流向由實驗區域內向外,緩沖間內通向內實驗室和走廊的門可安一種聯鎖裝置,當一個門打開時,另一門必須關閉狀態,防止出現兩個門同時打開的情況。


Part 02

各區的功能及主要設備

  1.試劑制備區主要是擴增試劑的配制,分裝盒保存。主要設備有天平、冰箱、離心機、加樣器、紫外燈。


2.樣品制備區主要是樣品的混樣和測試樣品的制備。主要設備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水設備、廢棄物容器、紫外燈。根據制備樣品的性質和要求決定操作臺是用生物安全柜、凈化工作臺、還是排毒柜,如疾控中心、臨床醫學實驗室一般選用生物安全柜,植物轉基因、檢疫等可選排毒柜。


3.擴增區是pcr擴增反應體系的配制和模板的加入,核酸擴增。加樣應在生物安全柜(超凈工作臺)內進行,超凈工作臺的氣流方向宜選擇垂直式。核酸擴增設備為冰箱、生物安全柜、離心機加樣器、廢棄物容器、紫外燈。


4.擴增產物分析區是擴增產物的測定。若實驗僅采用全自動擴增檢測儀,可將 區與擴增產物分析區合并為一個區。本區所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。

Part 03

實驗室空調通風系統設計及壓力控制

各個區域之間應具備單向的實驗工藝流、物流、人流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免實驗室之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產生假性結果。PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為了避免各個實驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送排的氣流組織形式。

Part 04

實驗室裝修

實驗室的墻體,包括頂棚,應結構牢固、氣密性好;所有陰角宜采用弧形線條過濾;墻體內壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒;地面材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。地面建議使用PVC卷材地面或自流平地面,整體性好,便于進行清掃,耐腐蝕。



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